2. Barvení modrým trichromem. Odvodnění tkáňových bločků, ředění alkoholu

2. Barvení modrým trichromem.
Odvodnění tkáňových bločků, ředění alkoholu

Barvení modrým trichromem
– přehledná barvící metoda, slouží k odlišení kolagenního vaziva

1) Deparafinace (X1, X2, A1, A2) – 5 minut, oplach ve vodě – 5 minut
2) Weigertův železitý hematoxylin (A = 1% hematoxylin v 96% alkoholu, B = dest. voda, chlorid železitý, HCl -> A+B=1:1) 3 – 10 minut, oplach vodou, po obarvení není nutné diferencovat, pouze pokud došlo k přebarvení tkáně, k diferencování používáme kyselý alkohol, pokud diferencujeme důkladně propíráme ve vodě
3) Roztok červeně (směs červených barviv – oranž G, kyselý fuchsin) – 1-3 minuty, oplach v dest. vodě
4) Moření 1% kyselinou fosfomolibdenovou (moření podporuje barvitelnost kolagenních vláken) – 3 – 5 minut
5) Bez oplachu anilinová modř – 5 minut, oplach v dest. vodě
6) Diferencování v 1% kyselině octové
7) Odvodnění (A1, A2, KX); projasnění (X1, X2); montování

VÝSLEDEK BARVENÍ
Jádra – modře až hnědočerně
Kolagenní vazivo – modře
Svalstvo – červeně

Odvodnění tkáňových bločků
Pokud tkáň zaléváme do médií nerozpustných ve vodě ( parafin, celoidin ), musíme po fixaci tkáň odvodnit, abychom ji mohli prosytit rozpouštědlem zalévacího média.
Provádí se řadou alkoholů o stoupající koncentraci
– první koncentrace závisí na druhu použité fixační tekutiny a na množství vody ve tkáni ( čím má tkáň vyšší obsah vody, tím nižší koncentraci volíme, aby nedošlo k svraštění tkáně )
– po Buenově tekutině můžeme použít maximálně 80 % alkohol, při vyšší koncentraci tkáň bobtná,
po Suse 90 % a po Pastelsově tekutině 100 % alkohol
stoupající řada alkoholů:
70% – 2 hodiny
80% – 4-6 hodin
96% – 6 hodin
100% – 3x 2 hodiny

Ředění alkoholu
Alkohol je dodáván do laboratoře většinou v koncentraci 96 %, nižší koncentraci dostaneme ředěním destilovanou vodou.Množství destilované vody a alkoholu se stanoví buď z tabulek nebo pomocí křížového pravidla ( vezmeme tolik mililitrů etanolu výchozí koncentrace, kolik je koncentrace žádaná a doplní se destilovanou vodou do tolika mililitrů, kolik je koncentrace výchozího alkoholu.
příklad:
– chceme připravit 70 % alkohol z alkoholu 96 %
– vezmeme 70 ml 96 % alkoholu a doplníme destilovanou vodou na 96 ml