1. Barvení hematoxylin – eosinem. Druhy hematoxylinu, jejich použití a způsoby barvení.

1. Barvení hematoxylin – eosinem. Druhy hematoxylinu,
jejich použití a způsoby barvení.

Barvení hematoxylin – eosinem
– základní barvící metoda

I. DEPARAFINACE
Xylen 1 – 5 minut
Xylen 2 – 5 minut
Alkohol 1 (100%) – 5minut
Alkohol 2 (96%) – 5 minut
Oplach ve vodě – 5 minut

II. VLASTNÍ BARVENÍ
1) kamencový hematoxylin – 3-10 minut
2) oplach v pramenité vodě
3) diferencování v kyselém alkoholu (na 100ml 96% alkoholu přidáme 3 – 5 kapek HCl) – hematoxylinem se obarví jádra, ale i zároveň se přibarví jiné složky tkáně např. vazivo, které odbarvujeme tzv. diferencováním v kys. alkoholu
4) modrání jader => praní v tekoucí vodě – 5 minut – zmodrání jader urychlíme vložením preparátu do 70% alkoholu případně vody s několika kapkami čpavku, oplach ve vodě
5) eosin 0,1% – 1-3 minut
6) oplach v dest. H2O

III. OVODNĚNÍ
Alkohol 1 – 1-3 minut
Alkohol 2 – 3-5 minut
Karbolxylen – 3-5 minut (lze nahradit acetone) = xylen nasycený kys. Karboxylovou =>dokončuje odvodnění

IV. PROJASNĚNÍ
Xylen 1 – 5 minut
Xylen 2 – 5minut
Řezy po projasnění xylenem musí být zcela průhledné, nesmí v nich zůstat bělavě zaklená místa; známka toho, že nebyly dobře odvodněny, pak preparáty musíme vrátit zpět do 100% alkoholu.

V. ZAMONTOVÁNÍ DO MONTOVACÍHO MÉDIA
Solakryl, kanadský balzám
Kapka montovacího média se kápne na krycí sklíčko; přebytečné médium se otře xylenem; řez nesmí při montování uschnout.

VÝSLEDEK BARVENÍ
Jádra a chrupavka – modře
Svalstvo – červeně
Kolagenní vazivo – růžově

Druhy hematoxylinů, jejich použití a způsoby barvení
Samotný roztok hematoxylinu nebarví, nejprve se musí oxidovat v hematein a poté přidáním mořidla vzniká hematoxylinový lak, který má již schopnost barvit.
Podle mořidla, které hematoxylin obsahuje je dělíme na kamencové a železité

1. Kamencové hematoxyliny
– obsahují jako mořidlo kamenec
– mají modro-fialový tón
Harrisův hematoxylin
Roztok A: hematoxylin 5g, etanol 50 ml
Roztok B: vařící dest. H2O 1000 ml, síran hlinitoamonný
Smísíme roztok A a B a povaříme
Bömerův hematoxylin
Meierův hematoxylin

2. Železité hematoxyliny
jsou hnědé až černé
Weigertův hematoxylin
Roztok A: 1% hematoxylin v 96% alkoholu
Roztok B: dest. voda 95ml, chlorid železitý 0,6g, HCl 0,75ml
Roztok A + B se smísí v poměru 1:1

Hematoxylinovým lakem je možné barvit buď přímo, nebo tak, že nejprve prosytíme tkáň mořidlem a pak ji vložíme do roztoku hematoxylinu, takže se hematoxylinový lak vytvoří přímo ve tkáni
( toho se využívá např. při barvení Heidenhainovým hematoxylinem )