16. Průkaz hlenu v pohárkových buňkách. SUSA – příprava a použití
16. Průkaz hlenu v pohárkových buňkách.
SUSA – příprava a použití
Průkaz hlenu v pohárkových buňkách
– Hlen v pohárkových buňkách se skládá z kyselých mukopolysacharidů, proto se dá prokázat těmito metodami:PAS reakcí – pohárkové buňky se barví červeně, barvením alciánovou modří -barví se modře
PAS reakce
– metoda na průkaz kyselých mukopolysacharidů a polysacharidů
PRINCIP: Oxidací kyselinou jodistou se z polysacharidů uvolní aldehydické skupiny, které reagují s Schiffovým reagens vznikem růžovo – červeného zbarvení.
Schiffovo reagens – 200ml vařící dest. vody, rozpustí se v ní 1g bazického fuchsinu, ochladit na 50°C, přidat 20ml 1mol HCl, ochladit na 25°C, 2g disiřičitanu sodného nebo draselného, nechat stát 24 hodin v temnu v uzavřené nádobě, přidat 2g aktivního uhlí (slouží k odstranění nečistot) protřepat a zfiltrovat
1) Deparafinace (X1, X2, A1, A2) – 5 minut, oplach ve vodě – 5 minut
2) 1% kyselina jodistá 5 minut, praní ve vodě 10 minut
3) Schiffovo reagens 5 – 20 minut v temnu, praní ve vodě 10 minut
4) Harrisův hematoxylin 3 – 5 minut, oplach vodou 5 minut
5) Odvodnění (A1, A2, KX); projasnění (X1, X2); montování
VÝSLEDEK BARVENÍ
PAS+ substance (glykogen, neutrální mukopolysacharidy, mukoproteiny) – purpurově červeně
Jádra – modře
Alciánová modř
– Metoda na průkaz kyselých mukopolysacharidů (např. na průkaz hlenu v pohárkových buňkách…)
1) Deparafinace (X1, X2, A1, A2) – 5 minut, oplach v dest. vodě – 5 minut
2) 1% alciánová modř 86X rozpuštěná v 3% kyselině octové 1 – 2 hodiny, oplach v dest. vodě
3) jádrová červeň 5 – 10 minut, oplach v dest. vodě
4) Odvodnění (A1, A2, KX); projasnění (X1, X2); montování
VÝSLEDEK BARVENÍ
Kyselé mukopolysacharidy – modrozeleně
Jádra – červeně
SUSA – příprava a použití
Obsahuje sublimát – HgCl2 , NaCl, kys. trichloroctová, formol a destilovanou vodu; Používá se hlavně k fixaci tvrdých tkání (kost, zub, zvápenatělá chrupavka, šlacha); kyselina trichloroctová zde slouží jako dekalcifikační prostředek – tkáň se tak zbavuje části minerálů již při fixaci; Po fixaci tkáň vkládáme do alkoholu (pokud tkáň obsahuje málo vody, používá se 90 % alkohol, pokud obsahuje více vody, vkládá se do méně koncentrovaného alkoholu)v alkoholu se provádí jodování – tkáň se zbavuje sraženin sublimátu
