18. Barvení Weigert van Giesonovou metodou. Příprava a použití fixačních prostředků s formolem

18. Barvení Weigert van Giesonovou metodou.
Příprava a použití fixačních prostředků s formolem

Barvení Weigert Van Giesnovou metodou
– Přehledná barvící metoda, slouží k průkazu kolagenního vaziva

1) Deparafinace (X1, X2, A1, A2) – 5 minut, oplach ve vodě – 5 minut
2) Weigertův železitý hematoxylin – 3 – 10 minut, oplach ve vodě, diferencování kyselým alkoholem, oplach ve vodě
3) (5% kyselina fosfowolframová – 5 minut, oplach v dest. vodě)
4) Pikrofuchsin – 3 -5 minut, oplach krátce v 80% alkoholu
5) Odvodnění (A1, A2, KX); projasnění (X1, X2); montování

VÝSLEDEK BARVENÍ
Jádra – modročerně až hnědočerně
Kolagenní vazivo – třešňově červeně
Svalstvo – žlutě

Příprava a požití fixačních prostředků s formolem
FORMOL
40% roztok formaldehydu ve vodě; nejužívanější fixační tekutina, bezbarvá, dráždivého zápachu (dráždí sliznice, při styku s kůží způsobí ztvrdnutí pokožky, u citlivých osob může vyvolat exémy – rukavice); účinkem světla se oxiduje na k. mravenčí -> to má nepříznivý vliv na fixaci, proto v laboratoři má být uchován v lahvi z tmavého skla, ve které ve výši asi 2 cm je práškovaný CaCO3; k fixaci se užívá 10 – 20% formol;
100% formol = 40% formaldehyd
10% formol = 4% formaldehyd
20% formol = 8% formaldehyd
formol (reakce lehce zásaditá) se ředí vždy pramenitou vodou (reakce lehce kyselá)

Výhody – rychle proniká; tkáň se po něm dobře barví; při krátkodobé fixaci nerozpouští tuky a lipidy; tkáň dobře tvrdí a konzervuje

Nevýhody – Způsobuje určité bobtnání tkání, buňkám dodává sklovitého vzhledu, proto je lepší užívat formol neutrální; v krevnatých orgánech často vznikají rezavě hnědě zbarvené „formolové sraženiny“ odstraníme: praní bločků v 1% roztoku hydroxidu draselném v 80% alkoholu 5 hodin; praní ve vodě 1 hodinu; praní v 80% alkoholu, několikrát měněném; praní ve vodě; tkáň se fixuje formolem 24 – 48 hodin; po fixaci do 70% alkoholu nebo se pere 2 – 4 hodiny v pramenité vodě
– NEUTRÁLNÍ FORMOL
Do lahve s formolem nasypeme práškový uhličitan vápenatý nebo hořečnatý do výše 2 – 5 cm, občas protřepeme láhev, formol zneutralizován za několik dní, ředíme pramenitou vodou, koncentrace 10 – 20%

– BAKEROVA TEKUTINA
Neutrální formol + CaCl2 + pramenitá voda; vhodná pro průkaz lipidů nebo enzymů

– SLANÝ FORMOL
Jeden díl neutrálního formolu + 9 dílů fyziologického roztoku

– NEUTRÁLNÍ NÁRAZNÍKOVÝ FORMOL
neutrální formol, dihydrogenfosforečnan sodný, hydrogenfosforečnan sodný (bezvodý); nárazník (pufr) udržuje určitou hodnotu pH

– BROMFORMOL
Neutrální formol + destilovaná voda + bromid amonný; k fixaci neuroglie