5. Barvení azanem. Zkvalitňování parafinu

5. Barvení azanem.
Zkvalitňování parafinu

Barvení azanem
– přehledná barvící metoda, slouží k odlišení kolagenního vaziva

1) Deparafinace (X1, X2, A1, A2) – 5 minut, oplach ve vodě – 5 minut
2) Azokarmín při 58°C – 30 minut
3) Krátký oplach v dest. vodě, diferencování v anilinovém alkoholu (96% alkohol + anilinový olej), přerušení diferenciace opláchnutím v kyselém alkoholu okyseleném kyselinou octovou, oplach v dest, vodě
4) Moření 5% kyselinou fosfowolframovou – 5 –10 minut, oplach v dest. vodě
5) Anilinová modř + orange G – 5minut, oplach v dest. vodě
6) Odvodnění (A1, A2, KX); projasnění (X1, X2); montování

VÝSLEDEK BARVENÍ
Jádra – karmínově červeně
Erytrocyty – oranžově červeně
Kolagenní vazivo – jasně modře
Svalstvo – červeně
Hlen a amyloid – modře

Zkvalitňování parafinu
Surový parafin, který přichází do laboratoře, obsahuje různé nečistoty, proto se musí přepalovat.
Přepalování se provádí na elektrické ploténce, několik hodin, až do zhnědnutí parafinu. Protože při přepalování unikají z parafinu také některé karcinogenní látky, musí se provádět v digestoři.
Do teplého přepáleného parafinu se přidá 3 – 5 % včelího vosku, musí se dát přesné množství, pokud ho dáme málo, bude parafin drobivý, pokud moc, bude naopak mazlavý. Takto připravený parafin se v termostatu přefiltruje a může se použít k zalévání.
Někdy se přepalování provádí v termostatu při teplotě 70 °C ( 2 – 3 dny )
– nevýhodou je, že se v termostatu hromadí škodlivé plyny.
– proprání ve vodě